丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的,丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關(guān),對(duì)于重組蛋白藥物(包括單抗)的非均一性分析變得越來越被重視。
采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動(dòng)相,借助于溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實(shí)現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機(jī)理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強(qiáng),多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。
1、樣品準(zhǔn)備:確保樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校⑦M(jìn)行充分的混勻。避免樣品中存在雜質(zhì)或固體顆粒,以防堵塞柱子。
2、柱子條件:選擇適當(dāng)?shù)闹映叽绾吞盍狭絹頋M足所需的分離效果。通常,較小的填料粒徑可以提供更好的分離效果,但也會(huì)增加柱子背壓。
3、流動(dòng)相選擇:丁基疏水色譜柱需要使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相的一部分。常見的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、乙腈等。根據(jù)待分離化合物的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相組合。
4、溫度控制:某些情況下,溫度對(duì)于改善分離效果非常重要??梢酝ㄟ^升高或降低溫度來調(diào)整選擇性和峰形。
5、柱子保護(hù):在使用丁基疏水色譜柱時(shí),建議在樣品進(jìn)樣之前使用保護(hù)柱。保護(hù)柱通常是與分離柱相同的填料材料,但長度較短。它可以防止樣品中的雜質(zhì)堵塞和損壞分離柱。
6、流速控制:選擇合適的流速以獲得理想的分離效果。過高的流速可能導(dǎo)致峰形變寬或峰形畸變。
7、柱子維護(hù):定期進(jìn)行柱子的維護(hù)和清洗操作,以確保其性能和壽命。遵循制造商提供的指南和推薦。