丁基疏水色譜柱是一款以丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。其填料材料通常采用具有丁烷基疏水性質(zhì)的有機硅，這種材料既具有良好的化學穩(wěn)定性，又能有效地保持化合物分子的親疏水平衡。此外，也有以粒徑為2.5微米的丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水色譜柱，如TSKgel Butyl-NPR色譜柱。

　　丁基疏水色譜柱的分離機理與反相色譜基本相同，都是利用溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實現(xiàn)分離。不同的是，其固定相的疏水性不如反相固定相強，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。在高濃度鹽溶液中，親水性較強的物質(zhì)分子內(nèi)部的疏水基團外露，可與疏水的固定相以疏水作用力相結合（吸附）。由于這種作用力大小不同，可以通過改變極性流動相的離子強度（由高到低）使其依次解吸附，從而實現(xiàn)分離。

　　丁基疏水色譜柱的一些使用技巧：

　　1、樣品預處理

　　去除雜質(zhì)：在使用之前，需要對樣品進行適當?shù)念A處理，去除其中的雜質(zhì)。雜質(zhì)可能會干擾分離過程，導致峰形拖尾或分離效果不佳?？梢允褂眠^濾、離心等方法去除樣品中的顆粒物和沉淀，也可以使用萃取、吸附等方法去除樣品中的雜質(zhì)分子。

　　調(diào)整pH值：樣品的pH值對丁基疏水色譜柱的分離效果有重要影響。一般來說，在中性或弱酸性的條件下，丁基疏水柱能夠更好地保持其親疏水平衡，從而實現(xiàn)更高效的分離。因此，在進樣前，需要根據(jù)樣品的性質(zhì)和分離要求，選擇合適的緩沖液來調(diào)整樣品的pH值。

　　調(diào)整離子強度：離子強度也會影響樣品與色譜柱填料之間的疏水相互作用。適當降低樣品的離子強度，可以增強疏水相互作用，提高分離效果?？梢酝ㄟ^稀釋樣品、使用低濃度的緩沖液等方法來調(diào)整樣品的離子強度。

　　2、色譜柱的選擇與連接

　　選擇合適規(guī)格：根據(jù)樣品的復雜程度、分析目的和實驗室條件等因素，選擇合適的色譜柱。例如，對于復雜樣品的分離，可以選擇較長、內(nèi)徑較小的色譜柱；對于快速分析，可以選擇較短、內(nèi)徑較大的色譜柱。

　　正確連接色譜柱：將色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。當溶劑均勻地從柱出口端流出時，再將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上，這樣可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng)，并且可快速達到基線平衡。

　　3、流動相的選擇與優(yōu)化

　　選擇合適的有機溶劑：通常使用含有有機溶劑（如乙腈、異丙醇）的緩沖液作為流動相，以促進生物大分子與色譜柱填料的疏水相互作用。不同的有機溶劑對分離效果有不同的影響，需要根據(jù)樣品的性質(zhì)和分離要求選擇合適的有機溶劑及其比例。

　　控制流動相的pH值：流動相的pH值會影響樣品和色譜柱填料的電荷狀態(tài)，從而影響疏水相互作用。在選擇流動相的pH值時，需要考慮樣品的穩(wěn)定性和溶解性，以及色譜柱的適用范圍。

　　優(yōu)化流動相的組成：通過調(diào)整流動相中不同組分的比例，可以優(yōu)化分離效果。例如，增加有機溶劑的比例可以增強疏水相互作用，但過高的比例可能會導致樣品在色譜柱上的保留時間過長；增加緩沖鹽的濃度可以調(diào)節(jié)樣品的電荷狀態(tài)，但過高的濃度可能會導致鹽析現(xiàn)象。

　　4、流速和壓力的控制

　　控制流速：在使用色譜柱時，需要注意控制流速。過高的流速可能會導致柱子破裂或分離效果不佳，而過低的流速則會延長分析時間。一般來說，可以根據(jù)色譜柱的內(nèi)徑和長度，以及樣品的復雜程度等因素，選擇合適的流速。

　　監(jiān)測壓力：在分離過程中，需要實時監(jiān)測色譜柱的壓力。如果壓力過高，可能是由于流速過快、樣品過載或色譜柱堵塞等原因引起的。此時需要及時調(diào)整操作參數(shù)，降低壓力，以避免對色譜柱造成損壞。

　　5、分離條件的優(yōu)化

　　梯度洗脫：對于復雜的樣品，可以采用梯度洗脫的方法來提高分離效果。梯度洗脫是指在分離過程中，逐漸改變流動相的組成或pH值，使不同的組分在不同的時間被洗脫出來。通過優(yōu)化梯度洗脫的程序，可以實現(xiàn)更好的分離效果。

　　溫度控制：溫度對疏水相互作用有一定的影響。適當提高溫度可以增強疏水相互作用，但過高的溫度可能會導致樣品變性或色譜柱的性能下降。因此，在進行丁基疏水色譜分析時，可以根據(jù)需要選擇合適的溫度。

　　6、色譜柱的維護與保養(yǎng)

　　定期清洗：使用新鮮潔凈的水與乙腈沖洗系統(tǒng)，確保系統(tǒng)干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。每次使用完色譜柱后，應及時用純水或適當?shù)娜軇┣逑瓷V柱，去除殘留的樣品和雜質(zhì)。

　　避免碰撞：取用色譜柱時避免磕碰掉落，以免損壞色譜柱的填料和結構。

　　長期保存：如果長時間不使用色譜柱，應將其保存在合適的條件下，避免污染和損壞?？梢詫⑸V柱保存在純水或適當?shù)娜軇┲校⒎胖迷陉帥?、干燥的地方?/div>