丁基疏水柱是一種常用的反相柱之一。它采用具有丁烷基疏水性質的有機硅做為填料材料,這種材料既有良好的化學穩(wěn)定性,同時又能有效地保持化合物分子的親疏水平衡,因而成為很多化學分離和分析的理想選擇。
丁基疏水柱可以用于分離多種化合物,如有機酸、有機堿、多肽、多糖等,尤其對脂肪酸、磷指等親質姓化食物的分離效果非常好。常用于高效液相色譜(HPLC)分離脂溶性化倉物。在蛋白質分離方面,丁基疏水柱常用于在酸性條件下分離親水性的多肽,同時也可以分離大大小小的多糖。
使用丁基疏水色譜柱有哪些注意事項?
1、當使用2.1mm內徑色譜柱時,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬。
2、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。
3、使用新鮮潔凈的水與乙腈,沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
4、將入口端連接到系統(tǒng)上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
5、重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規(guī)分析時所使用的流速。
6、參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定。