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親水色譜柱的使用與維護(hù)方法如下!

更新時(shí)間:2023-02-07瀏覽:448次
 
  親水色譜柱是一種直接分離極性和親水性化合物的色譜技術(shù),為了便于理解,我們可以把它看作為是一種用反相色譜溶劑作流動(dòng)相的正相色譜。因此,HILIC是親水性的流動(dòng)相,以水、有機(jī)溶劑和緩沖鹽作為流動(dòng)相。常見(jiàn)的HILIC方法采用50%~90%有機(jī)溶劑和一定比例的水,并且含有低濃度的緩沖鹽。如乙腈/水/醋酸銨體系。在HILIC方法中,洗脫順序和反相色譜正好相反,即極性越大,保留時(shí)間越長(zhǎng)。
  親水色譜柱的使用及維護(hù)方法;
  1、樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的親水色譜柱。
  2、如果樣品極性太強(qiáng),或酸性太強(qiáng);可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換親水色譜柱(缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng),對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái),基本上用了離子對(duì)的親水色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn))。
  3、若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾,一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做,因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留。
  4、如果堿性化合物的極性太強(qiáng),或堿性太強(qiáng);可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)(優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單,缺點(diǎn)是目前實(shí)現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價(jià)格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法)選擇強(qiáng)離子交換柱(缺點(diǎn)是不能用來(lái)分析其它樣品,對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn))也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換親水色譜柱。
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