層析柱的操作方法:

　　以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例

　　1、吸附劑的處理及柱子裝填

　　將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中，于105C活化2H后，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵人溶劑，至溶劑流出止。

　　2、上樣

　　將冬凌草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解，泵人中壓柱柱頭，然后泵人石油醚1000RID。

　　3、洗脫

　　以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液，60ML/MIN的流速進行梯度洗脫，柱的使用壓力為2~ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC檢識展開劑丙酮一氯(2:8)，顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液

　　至洗脫*，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置，析出結(jié)晶，為冬凌草甲素。

　　4、層析柱再生、平衡

　　有效成分經(jīng)TLC檢識全部流出后，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5:95)平衡后，可再次上樣，反復使用(使用次數(shù)隨原料不同而異，一般可連續(xù)使用2-6個月以上)。

　　5、重結(jié)晶

　　冬凌草甲素結(jié)晶析出*后，減壓過濾，然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保留，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結(jié)晶再次析出，待結(jié)晶*后，抽濾，用少量洗滌，將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。

　　6、薄層層析分析

　　取適量冬凌草甲素對照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解后點于同一硅膠G薄層板上，以氯一丙酮(8:2)為展開劑進行展開，5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色，于105。C烘至斑點清晰。表明在該展開系統(tǒng)下，冬凌草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值，并呈現(xiàn)出同樣的藍綠色斑點，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒有雜質(zhì)斑痕。