凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡單、操作方便,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果。
凝膠色譜技術(shù)是以多孔凝膠為固定相,利用凝膠孔的空間尺寸效應(yīng),使不同大小的分子按照由大到小的洗脫順序達(dá)到分離的液相色譜(HPLC)方法,從而達(dá)到凈化的目的。此外,凝膠色譜還有因?yàn)槎栊晕⑶虮砻鎸?duì)有機(jī)物吸附小所以柱污染小,以及脫鹽等優(yōu)點(diǎn)。
凝膠色譜柱的清洗:
為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。首先要用對(duì)被測樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動(dòng)相是緩沖溶液,則應(yīng)先用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗。
凝膠色譜柱的存放:
1、幾天之內(nèi)的短期放置,凝膠柱則用蒸餾水來沖洗,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
2、如果色譜柱長期不用,僅用上述方法來處理就不行了,這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會(huì)使柱效降低,此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長期放置時(shí),一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán),以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
3、色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰,這也將導(dǎo)致柱效的降低。