C18反相色譜柱每一根色譜柱都有一個(gè)大致的進(jìn)樣針數(shù)壽命，理論上可以有一個(gè)規(guī)定，達(dá)到進(jìn)樣多少針，就強(qiáng)制報(bào)廢。不過好像并沒有這樣的規(guī)定，那么也可以作為一個(gè)參考，當(dāng)色譜柱的柱性能參數(shù)（就是常說的理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子等等）不達(dá)標(biāo)時(shí)，參照進(jìn)樣針數(shù)判斷是柱子壽命到了，屬于不可逆因素，只能換柱子。還是其它原因，如流動(dòng)相配制錯(cuò)誤，或者流動(dòng)相變質(zhì)了，也可能稀釋液強(qiáng)度太大，也可能是方法就是錯(cuò)的，也可能是樣品本身問題。

不過色譜柱的累積性損壞自然不是一朝一夕的事，柱性能是緩慢下降的，但是沒有一個(gè)特定的標(biāo)準(zhǔn)，要看具體的分析方法，而且跟柱型號(hào)也有關(guān)系。常規(guī)的分析方法下C18反相色譜柱壽命是很長的，因?yàn)镃18柱是目前技術(shù)，質(zhì)量zui可靠，使用zui廣泛的色譜柱，在常規(guī)分析方法下，基本上不會(huì)損壞。但是如果流動(dòng)相比較特殊，如高鹽、高pH>8、低pH<1、高柱溫、高比例水相、高比例有機(jī)相等等，色譜柱的損壞就會(huì)相應(yīng)地加劇。

這

前面提到了柱型號(hào)，不同型號(hào)的色譜柱壽命當(dāng)然也不一樣，跟前面說到的C18反相色譜柱類似的，CN柱、苯基柱等鍵合硅膠柱都具有較長的使用壽命。不過所有基于硅膠基質(zhì)的色譜柱都有一個(gè)天生的弱點(diǎn)，就是硅膠是能被水溶解的，雖然溶解度很小，但是長年累月使用，尤其在反相色譜系統(tǒng)中，累加了高鹽、高pH、高柱溫、高比例水相等方法參數(shù)后，硅膠的流失尤為明顯。我做過一個(gè)項(xiàng)目，流動(dòng)相含鹽，柱溫高達(dá)50度，基本上一根色譜柱半年就報(bào)廢了。不過，是有一種方法可以解決這個(gè)問題的，就是在色譜柱前加一個(gè)柱芯與色譜柱類型相同的預(yù)柱，也叫保護(hù)柱，當(dāng)流動(dòng)相里溶解預(yù)柱里的硅膠飽和以后，就不再侵蝕色譜柱的硅膠，從而大大延長色譜柱壽命。不過不到萬不得已還是不要使用特別苛刻的流動(dòng)相，要知道預(yù)柱的柱芯也是很貴的，那就是一根較短的色譜柱啊，就算保住了色譜柱，經(jīng)常換柱芯也是吃不消的。

還有一類柱子，就是手性分離柱，這在醫(yī)藥行業(yè)是很大的一個(gè)應(yīng)用。通常手性色譜柱是正相柱，這就要求我們?cè)谑褂檬中灾耙劝严到y(tǒng)置換干凈，再接上柱子用流動(dòng)相沖洗平衡進(jìn)樣。通常是甲醇、異丙醇、正已烷+異丙醇、流動(dòng)相這樣的順序，如果忘記這個(gè)過程，會(huì)造成很大的麻煩。而且有一些手性柱是涂敷柱，例如淀粉、纖維素等大分子涂敷柱非常怕水，如果系統(tǒng)中原來的反相流動(dòng)相沒有置換干凈，就會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆損傷，甚至報(bào)廢。近年來，科學(xué)家也開發(fā)出了鍵合的手性柱，相比較要穩(wěn)定的多，甚至也可以應(yīng)用反相色譜系統(tǒng)。

使用后對(duì)色譜柱的沖洗保存也比較重要，使用了緩沖系統(tǒng)的尤其要注意。這里推薦一個(gè)反相色譜系統(tǒng)的通用沖洗流程：將所有通道置換成含有較低有機(jī)相比例的水相中，比如10-30%乙腈或甲醇，然后沖洗1個(gè)小時(shí)，然后再梯度增加有機(jī)相比例，各沖洗一定時(shí)間，zui終保留在高有機(jī)相比例的沖洗液里。低有機(jī)相比例的沖洗液是為了盡可能地沖洗緩沖鹽。通常低壓梯度洗脫的液相色譜儀采用的是四元泵，就是單泵四通道，比例閥混合。這種混合方式有個(gè)弊端，就是混合效果差，因?yàn)楦魍ǖ啦煌壤峭ㄟ^開關(guān)各通道閥的時(shí)間來控制的。打比方乙腈：緩沖鹽=50：50，如果流速是1.0mL/min，并不是說乙腈和緩沖鹽以各0.5mL/min的流速來混合；而是流速一直是1.0mL/min，但是在往復(fù)泵一個(gè)來回的時(shí)間內(nèi)，兩個(gè)通道分別打開一半的時(shí)間，也就是說系統(tǒng)管道里是一段乙腈、一段緩沖鹽。這樣就會(huì)造成鹽的析出。所以，往往是兩通道混合，就算沒有用緩沖鹽，還是建議先按比例混合好了，然后走單通道，否則的話一樣會(huì)造成鹽析出，或者基線波動(dòng)。走梯度洗脫的話，往往會(huì)把有機(jī)相通道（B）中加入一定比例的水，或者把水相通道（A）配成梯度洗脫的初始比例，把有機(jī)相通道（B）配成梯度洗脫zui終的比例。

這里有兩點(diǎn)需要說明，*，一般認(rèn)為，色譜系統(tǒng)包括色譜柱的沖洗甚至保存，都可以使用流動(dòng)相，只是不加緩沖鹽、酸堿等。例如上面提到的乙腈：緩沖鹽=50：50，做完樣品以后，就可以用50%乙腈/水來沖洗保存。有一些品牌色譜柱，例如資生堂，建議如果不是含鹽或者強(qiáng)酸強(qiáng)堿，一般不建議沖洗。不過這只適合短期保存，也就是沒隔多久又要再次使用。長期不用的色譜系統(tǒng)包括色譜柱還是應(yīng)該沖洗后保存在高比例低極性溶劑體系中。一般建議正相系統(tǒng)保存在正已烷：異丙醇=90：10，反相系統(tǒng)保存在乙腈：水=90：10或者100%乙腈中。第二，隨著快速分離色譜柱的發(fā)展，很多的低粒徑色譜柱得到應(yīng)用，而且往往柱溫也較高，通常達(dá)到50度或以上，這種色譜系統(tǒng)通常柱壓也較高，貿(mào)然用高比例水相沖洗可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)超壓?？梢韵扔昧鲃?dòng)相沖洗，或者斷開色譜柱，用高比例水相沖洗系統(tǒng)，再接上柱子逐步提高有機(jī)相比例沖洗，也可以先調(diào)低流速?zèng)_洗。而且，待沖洗快要結(jié)束時(shí)再降低柱溫。