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影響親和色譜柱的因素有:
1)上樣體積
若目標產(chǎn)物與配基的結(jié)合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結(jié)合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是什么意思,是指柱子所能吸附的zui大量嗎。。求大神解釋T ^T)
2)柱長
親和柱的長度需要根據(jù)親和介質(zhì)的性質(zhì)確定。如果親和介質(zhì)的載量(同上 求解釋T ^T)高,與目標產(chǎn)物(目標物)的作用力強,可以選擇較短的珠子(柱子);相反,則應該增加柱子的長度,保證目標產(chǎn)物與親和介質(zhì)有充分的作用時間。
3)流速
親和吸附時目標產(chǎn)物與配基之間達到結(jié)合反應平衡需要一個緩慢的過程。因此,樣品上柱的流速應盡量的慢,保證目標產(chǎn)物與配基之間有充分的時間結(jié)合,尤其是二者間結(jié)合力弱和樣品濃度過高時。
4)溫度
溫度效應在親和色譜中比較重要,親和介質(zhì)的吸附能力受溫度影響,可以利用不同的溫度進行吸附和洗脫。一般情況下親和介質(zhì)的吸附能力隨溫度的升高而下降,因此在上樣時可選擇較低的溫度,使待分離物質(zhì)與配基有較大的親和力,充分地結(jié)合;而在洗脫時刻采用較高的溫度,使待分離物質(zhì)與配基的親和力下降,便于待分離物質(zhì)從配基上脫落。
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